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质粒DNA
转染效率

一、实验结果

1.      倒置荧光显微镜拍照结果

图1. 长春金传科技有限公司的GoldenTran-DR产品在C8-D1A细胞内转染pEGFP质粒24h的绿色荧光蛋白表达和细胞明场照片。

2.      流式细胞术检测pEGFP转染后的定量结果

图2. 长春金传科技有限公司的GoldenTran-DR产品在C8-D1A细胞内转染pEGFP质粒24h的转染效率(A)和平均荧光强度(B)。不同颜色柱子代表转染试剂与pDNA的体积质量比(μL:μg)。

3.      光度计检测pFluc转染后的定量结果

图3. 长春金传科技有限公司的GoldenTran-DR产品在C8-D1A细胞内转染pFluc质粒48h的转染效率。不同颜色柱子代表转染试剂与pDNA的体积质量比(μL:μg)。


二、操作步骤

1.      将细胞接种到24孔板中,每孔接种5.0×104个细胞,细胞培养12~24小时,使转染时细胞密度达到60~70%融合度;

2.      取1μL的GoldenTran-DR加入到9μL的Opti-MEM培养基中,稀释后的终体积为10μL,将0.5μg pEGFP质粒加入Opti-MEM培养基中,稀释后的终体积为10μL;

3.      将上述GoldenTran-DR稀释液和质粒pEGFP质粒稀释液混合(体积质量比2:1,μL:μg),轻轻吹打均匀后,室温静置10分钟;

4.      将上述20μL复合物加入到24孔板中,轻轻吹打混匀,继续培养18~48小时后检测转染效率,无需更换培养基。

5.      转染24h后,倒置荧光显微镜拍照观察EGFP蛋白定性表达情况,并用流式细胞仪检测EGFP蛋白的定量表达效率。


三、不同孔板建议使用剂量


四、注意事项

1.      需自备OPTI-MEM培养基,用以稀释转染试剂和质粒DNA。

2.      转染试剂常温运输,4℃保存,避免反复冻融,建议分装使用。

3.      转染后无需换液,亦可根据实验需要,4~6h更换培养液。

4.      初次使用,建议优化转染试剂和质粒DNA的使用剂量。

5.      使用高纯度的无内毒素质粒DNA可获得高效转染效率。

6.      本产品仅限基础科学研究。